商品参数

品牌: BioSharp
品名: 化学发光底物
编号: BL520A
描述:

产品简介: West Pico ECL 是一款增强型化学发光 HRP 底物, 用于检测直接或间接标记辣根过氧化物 酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。该 ECL 底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释 液,以出色性能、通用性和高性价比,满足用户的免疫印迹应用需求。 产品组份: 产品编号 产品名称 规格 BL520A-1 增强型发光液 A 液 50ml BL520A-2 稳定剂 B 液 50ml 用途:用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。 产品特点: 1、ECL:用于辣根过氧化物酶 (HRP)的增强型化学发光底物; 2、低皮克级灵敏度:检测硝化纤维素膜或 PVDF 膜上低皮克级的蛋白条带; 3、长信号持续时间:在条件优化情况下,经底物孵育的印迹条带能够持续输出 6 至 8 小 时的可检测光信号; 4、稳定试剂:工作液在 24 小时内保持稳定。 使用方法: 1、执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。 2、Western Blot 最后一次洗膜的同时配制新鲜发光工作液:分别取等体积的溶液 A 和 B, 放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3、用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液 (0.125mL 发光工作液/cm2 膜)中,使膜与发光工作液充分接触。室温孵育 3 分钟,准备立即 压片曝光。 4、滤纸上沥干膜上发光工作液,但勿洗去发光液。 5、打开 X 光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将 WesternBlot 膜贴在 保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹 Western Blot 膜,去除气泡和皱褶 。 6、暗房内压 X 光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 注意事项: 1、步骤 1~5 可在日光灯下操作 ,但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低, 移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2、长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带 模糊。 3、发光工作液孵育约 3 分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋 白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光 时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 小 时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和 曝光。 4、由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:5000, 二抗 1:20000~1:100000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。 5、使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光 -放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条 带的位置和大小。 6、NaN3 能抑制 HRP 活性,回收第二抗体应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。 

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